高電場強度電泳時,可通過以下方法降低核酸樣品的熱效應:
使用低溫設備
優(yōu)化緩沖液
選擇合適的緩沖液:不同的緩沖液具有不同的熱穩(wěn)定性和散熱能力。例如,TBE 緩沖液的緩沖能力較強,在高電場強度下能更好地維持體系的 pH 穩(wěn)定,減少因 pH 變化引起的熱效應。同時,其離子強度適中,可降低電泳過程中的產熱。
預冷緩沖液:在電泳前將緩沖液放入冰箱或冷柜中預冷至 4 - 10℃,然后再加入電泳槽中。預冷的緩沖液在電泳初期能吸收較多熱量,延緩溫度上升的速度。
更換緩沖液:電泳過程中,隨著熱量的產生,緩沖液的溫度會逐漸升高。及時更換緩沖液,可保持緩沖液的散熱能力,降低熱效應。一般建議在電泳過程中每隔一段時間(如 1 - 2 小時)更換一次緩沖液。
調整電泳參數
降低電壓:在保證核酸分子能夠有效分離的前提下,適當降低電場強度,即降低電壓。較低的電壓會減少電泳過程中的產熱量,從而降低熱效應。例如,將電場強度從 12 V/cm 調整到 10 V/cm 或更低,根據核酸分子的大小和分離要求進行優(yōu)化。
縮短電泳時間:盡量縮短電泳時間,減少熱量的積累??赏ㄟ^優(yōu)化凝膠濃度、緩沖液條件等方法,提高核酸分子的遷移速度,在保證分離效果的同時縮短電泳時間。
優(yōu)化樣品處理